1. 产品概述
EHA105 菌株由 EHA101 菌株改造而来,为 C58 型背景,核基因中含有筛选标签(利福平抗性基 Rif),为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA), 此质粒含有 vir 基因(vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件,pEHA105(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体 TDNA 顺利转移)。本公司生产的 EHA105 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率≥104cfu/μgDNA。
2. 产品组分
| 组分 | CC1402-01 |
| EHA105 化学感受态细胞 | 10×100μL |
基因型:C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
3. 保存条件
-80℃保存至少 6 个月,请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。干冰运输。
4. 适用场景
本产品适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。
5. 使用方法
1. 将感受态细胞从-80℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100μL 感受态细胞中,用手拨打管底混匀,依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分钟(或干冰乙醇浴和-80℃冰冻)、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟;
3. 加入 900μL 无抗生素的 YEB 液体培养基,于 28℃振荡培养 2~3 小时;
4. 6000rpm 离心 1 分钟收菌,留取 100μL 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天。
※当平板只含有 50μg/mL Kan 时,28℃培养 48h 即可;平板中同时加入 50μg/mL Kan,20μg/mL Rif 时,需 28℃培养 60h;如果使用的平板含有 50μg/mL Rif 则需要 28℃培养 72-90h。

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