1. 产品概述
BL21(DE3)感受态细胞适用于无毒异源基因的表达。该菌株含有受 lacUV5 启动子控制的T7 RNA 聚合酶基因(λDE3)，可实现 IPTG 诱导的T7 RNA 聚合酶表达。BL21(DE3)是一种大肠杆菌 B 菌株，不含 lon 蛋白酶。其也缺乏外膜蛋白酶 OmpT。不存在这两种关键蛋白酶可降低细胞中表达的异源蛋白的降解。转化效率超过 107cfu/μgDNA，可以用于 pET 等系列质粒的蛋白高效表达。
2. 产品组分
| 组分 | CC1405-01 |
| BL21(DE3)化学感受态细胞 | 10×100 μL |
基因型： F - ompT hsdSB (rB - mB - ) gal dcm (DE3)
3. 保存条件
-80℃保存至少 6 个月，请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。干冰运输。
4. 适用场景
本产品适用于 pET 等系列质粒的蛋白高效表达。
5. 使用方法
1. 从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约 5-10 min，放置时间过长会影响转化效率；
2. 每 100 μL 感受态加入待转化 DNA 样品约 10 μL，然后轻轻弹击管底约 2-3 次，立即冰上静置孵育 30 min；加入待转化 DNA 样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
3. 将冰浴后的离心管快速置于 42℃水浴中，静置热激 90 s。随后立即转移至冰水浴中静置 2-3 min 以快速冷却。热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。
4. 加入 900 μL37℃预热的 LB 或 SOC 培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约 220 rpm 复苏培养 45 min。
5. 如果用于质粒的转化扩增，建议直接取 50-100 μL 进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先 5000 g，1 min 室温离心沉淀细菌，吸除约 900-950 μL 上清，然后用剩余的约 50-100 μL 菌液重悬，涂布到含相应抗生素的 LB 平板上。
6. 将平板倒置放于 37℃培养箱培养过夜。将平板稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。
6. 注意事项
1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用。
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10。
3. 为确保更高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。
4. 本产品仅作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，实验时请穿实验服并戴一次性手套操作。
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