产品介绍
真核生物中，mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊的帽子结构(m7Gppp5'N)，此结构与mRNA的稳定性、转运(出核)和翻译紧密相关。通过酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法，能够显著改善体外转录的用于转染和显微注射的RNA的稳定性和翻译能力。牛痘病毒加帽酶(Vaccinia Capping Enzyme)由两个亚基(D1，D12)组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，它们对于添加一个完全的Cap0结构都是必须的。在合适浓度的S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine，SAM)，鸟苷三磷酸(GTP)等条件存在下，牛痘病毒加帽酶能够将帽子结构(m7Gppp，Cap0)加到RNA5'端。本品可用于T7 RNA Polymerase催化的体外转录反应产生的RNA的加帽反应。
产品组成
储存条件
-20℃保存，＜0℃运输。▲避免反复冻融。
适用范围
体内或体外翻译前mRNA的加帽反应和5'末端标记反应。
注意事项
1. 本加帽反应效率受RNA 5'端结构影响，因此建议通过热变性(65℃加热5 min，冰上放置5 min)打开RNA 5'端的高级结构。变性条件可根据RNA 5'端结构复杂程度进行调整，若5'端无高级结构，本步骤可省略。
2. 本加帽反应一般可以在30 min内完成，若RNA 5'端结构复杂或RNA长度较短(≤ 200 nt)，可延长反应时间至60 min。
3. SAM在pH 7 - 8，37℃条件下不稳定，需要在反应开始前新鲜配置。为避免SAM降解，该工作液需要保存于冰上。
4. 反应体系中可添加RNA酶抑制剂防止RNase污染，建议使用浓度1 - 2 U/μl。
5. 经本制品Cap0加帽的RNA可以通过2'氧甲基转移酶甲基化形成Cap1 RNA。
6. 经本制品Cap0加帽的RNA可以通过Poly(A)聚合酶在3'端加上Poly(A)序列，形成完整的mRNA，用于后续转染实验或者体外翻译实验。
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