产品介绍
常规的DNA 纯化方式并不能有效地去除粪便中存在的大量抑制因子而导致下游实验的失败,如PCR 不能扩增出所需片段。该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,能有效去除动物粪便中各种影响下游实验(如PCR)的抑制因子,并能高效地回收粪便中的基因组DNA。动物粪便样品经特殊缓冲液ASL 重悬后,70℃处理5 分钟裂解细菌;离心去除不溶解的杂质,蛋白酶K 消化进一步去除蛋白和杂质;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA 从硅基质膜上洗脱。
产品组成
储存条件
本试剂盒在室温储存12 个月不影响使用效果。
注意事项
1. 所有的离心步骤均可在室温完成(4℃离心也可以),使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
3. 结合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH 大于7.5,pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存,可以用TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
5. PCR 可能被过量的DNA(一般大于1μg)抑制,使用最小用量的洗脱DNA(适当稀释)反而可以得到更好的扩增。一般加入的洗脱DNA体积不要超过总PCR 反应体积的10%。我们建议在PCR 反应体系中加入终浓度0.1 μg/μl 的BSA(牛血清白蛋白)有助于得到最佳扩增效果。

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